轉自：藥融圈
2004年世界第一個商品化UPLC產品的Waters ACQUITY UPLC 超高效液相色譜系統問世。UPLC從HPLC出發，借助于HPLC的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。
超高效液相色譜是HPLC的后繼技術，它的分析效率與HPLC相似，但操作壓力要高得多。與HPLC柱中的顆粒(< 6000 psi)相比，UPLC可以承受 9000 psi或更高的系統壓力，以獲得高流速。大多數高效液相色譜柱的顆粒大小在2.5到5μm之間。而UPLC色譜柱是低于2μm多孔顆粒。由于顆粒尺寸小，固定相與分析物之間的擴散路徑更短，效率更高。相比HPLC，UPLC擁有著：高分離度、高速度，省時、省費、省人工，適合復雜體系如復方制劑，彌補HPLC方法不足等優勢。
2016年3月，美國藥典（USP）全面認可了UPLC技術，在USP 39版本中收錄了57個品種藥物的UPLC檢測方法，從法規層面為全球應用UPLC技術的廣大制藥企業提供了明確的使用指導原則。現階段大多數藥物檢測標準延用HPLC方法，如何對現有HPLC方法進行升級，將現有的HPLC方法順利轉到UPLC平臺，引起了熱烈的探討。
通用的將HPLC 方法轉換為UPLC 方法有以下三個步驟：
選擇與藥典方法指定色譜柱相當的HPLC色譜柱，并運行藥典中具體品種的各論方法
使用方法轉換公式將HPLC方法轉換為UPLC方法
按照藥典要求，對轉化后的UPLC方法進行評價
HPLC色譜柱選擇
選擇等效的色譜柱成為轉換的首要條件，這也是方法轉換的難點之一。《中國藥典》并未對色譜柱做出詳細指示，為了準確選擇與藥典各論中指定的色譜柱類型性能相當的色譜柱，如果藥典各論方法中沒有規定色譜柱的具體品牌和規格，一般需要進行色譜柱的篩選實驗，以便選出一款符合藥典方法要求的色譜柱，通常情況下，這是一個比較耗時的工作。
HPLC/UPLC方法轉換
針對兩者的差異進行轉換研究:色譜柱填料粒徑不同、系統體積不同、儀器輸送流動相系統內徑不同，將會影響到流速、進樣量、梯度洗脫程序，因此需要對這三個參數進行調整。
?1.?流速的改變?
流速主要是指流動相在色譜柱中的線速度，與色譜柱內徑dc有關，流速的計算公式為：
目標流速=（原方法流速*目標柱內徑2*原粒徑）/原色譜柱內徑2/現粒徑
流速的調整需要注意不改變線速度
?2.?進樣量的改變?
由于UPLC上使用的色譜柱柱體積一般比普通HPLC上小很多，所以載樣量也會有所降低，如果這時不減小進樣量，有可能造成樣品過載或溶劑效應。而進樣量與柱體積成正相關。
目標進樣體積=原方法進樣體積*目標柱體積/原色譜柱體積
進樣量的改變需要注意不改變供試液的濃度
?3.?梯度洗脫程序轉換?
梯度洗脫需調整梯度洗脫程序。
通常色譜儀器均配備轉換軟件，輸入原始洗脫程序，軟件可自動計算并轉換為目標儀器的洗脫程序。
當然，UPLC/HPLC的轉換還有著更多的奧秘，不同的變量都對方法轉移有著不同程度的影響，為了更加深入的探究，藥融圈聯合沃特世共同邀請到南京藥石科技股份有限公司 CMC分析部分析總監張明以及沃特世科技（上海）有限公司大中華區資深應用工程師楚朋飛，在2023年3月27日藥融云端直播間，共同探討分析UPLC的使用策略，希冀能在HPLC/UPLC方法轉移時提供助力。