轉(zhuǎn)自：藥融圈
2004年世界第一個(gè)商品化UPLC產(chǎn)品的Waters ACQUITY UPLC 超高效液相色譜系統(tǒng)問世。UPLC從HPLC出發(fā)，借助于HPLC的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。
超高效液相色譜是HPLC的后繼技術(shù)，它的分析效率與HPLC相似，但操作壓力要高得多。與HPLC柱中的顆粒(< 6000 psi)相比，UPLC可以承受 9000 psi或更高的系統(tǒng)壓力，以獲得高流速。大多數(shù)高效液相色譜柱的顆粒大小在2.5到5μm之間。而UPLC色譜柱是低于2μm多孔顆粒。由于顆粒尺寸小，固定相與分析物之間的擴(kuò)散路徑更短，效率更高。相比HPLC，UPLC擁有著：高分離度、高速度，省時(shí)、省費(fèi)、省人工，適合復(fù)雜體系如復(fù)方制劑，彌補(bǔ)HPLC方法不足等優(yōu)勢。
2016年3月，美國藥典（USP）全面認(rèn)可了UPLC技術(shù)，在USP 39版本中收錄了57個(gè)品種藥物的UPLC檢測方法，從法規(guī)層面為全球應(yīng)用UPLC技術(shù)的廣大制藥企業(yè)提供了明確的使用指導(dǎo)原則。現(xiàn)階段大多數(shù)藥物檢測標(biāo)準(zhǔn)延用HPLC方法，如何對現(xiàn)有HPLC方法進(jìn)行升級，將現(xiàn)有的HPLC方法順利轉(zhuǎn)到UPLC平臺，引起了熱烈的探討。
通用的將HPLC 方法轉(zhuǎn)換為UPLC 方法有以下三個(gè)步驟：
選擇與藥典方法指定色譜柱相當(dāng)?shù)腍PLC色譜柱，并運(yùn)行藥典中具體品種的各論方法
使用方法轉(zhuǎn)換公式將HPLC方法轉(zhuǎn)換為UPLC方法
按照藥典要求，對轉(zhuǎn)化后的UPLC方法進(jìn)行評價(jià)
HPLC色譜柱選擇
選擇等效的色譜柱成為轉(zhuǎn)換的首要條件，這也是方法轉(zhuǎn)換的難點(diǎn)之一。《中國藥典》并未對色譜柱做出詳細(xì)指示，為了準(zhǔn)確選擇與藥典各論中指定的色譜柱類型性能相當(dāng)?shù)纳V柱，如果藥典各論方法中沒有規(guī)定色譜柱的具體品牌和規(guī)格，一般需要進(jìn)行色譜柱的篩選實(shí)驗(yàn)，以便選出一款符合藥典方法要求的色譜柱，通常情況下，這是一個(gè)比較耗時(shí)的工作。
HPLC/UPLC方法轉(zhuǎn)換
針對兩者的差異進(jìn)行轉(zhuǎn)換研究:色譜柱填料粒徑不同、系統(tǒng)體積不同、儀器輸送流動(dòng)相系統(tǒng)內(nèi)徑不同，將會(huì)影響到流速、進(jìn)樣量、梯度洗脫程序，因此需要對這三個(gè)參數(shù)進(jìn)行調(diào)整。
?1.?流速的改變?
流速主要是指流動(dòng)相在色譜柱中的線速度，與色譜柱內(nèi)徑dc有關(guān)，流速的計(jì)算公式為：
目標(biāo)流速=（原方法流速*目標(biāo)柱內(nèi)徑2*原粒徑）/原色譜柱內(nèi)徑2/現(xiàn)粒徑
流速的調(diào)整需要注意不改變線速度
?2.?進(jìn)樣量的改變?
由于UPLC上使用的色譜柱柱體積一般比普通HPLC上小很多，所以載樣量也會(huì)有所降低，如果這時(shí)不減小進(jìn)樣量，有可能造成樣品過載或溶劑效應(yīng)。而進(jìn)樣量與柱體積成正相關(guān)。
目標(biāo)進(jìn)樣體積=原方法進(jìn)樣體積*目標(biāo)柱體積/原色譜柱體積
進(jìn)樣量的改變需要注意不改變供試液的濃度
?3.?梯度洗脫程序轉(zhuǎn)換?
梯度洗脫需調(diào)整梯度洗脫程序。
通常色譜儀器均配備轉(zhuǎn)換軟件，輸入原始洗脫程序，軟件可自動(dòng)計(jì)算并轉(zhuǎn)換為目標(biāo)儀器的洗脫程序。
當(dāng)然，UPLC/HPLC的轉(zhuǎn)換還有著更多的奧秘，不同的變量都對方法轉(zhuǎn)移有著不同程度的影響，為了更加深入的探究，藥融圈聯(lián)合沃特世共同邀請到南京藥石科技股份有限公司 CMC分析部分析總監(jiān)張明以及沃特世科技（上海）有限公司大中華區(qū)資深應(yīng)用工程師楚朋飛，在2023年3月27日藥融云端直播間，共同探討分析UPLC的使用策略，希冀能在HPLC/UPLC方法轉(zhuǎn)移時(shí)提供助力。